LAPORAN PRAKTIKUM KULTUR IN-VITRO-2

LAPORAN PRAKTIKUM KULTUR IN-VITRO-2

Download File

LAPORAN PRAKTIKUM KULTUR IN-VITRO-2.docx

 keyword :

 laporan praktikum kultur in-vitro laporan ini di susun guna untuk memenuhi tugas praktikum kultur in-vitro mata kuliah pembiakan vegetatif dosen pengampu disusun oleh kelompok ii 1 shoviatun nikhmah 2012-41-013 2 ayu suci haristin 2012-41-016 3 ari nur hidayat 2012-41-011 4 ahmad dahlan 2012-41-010 5 siti khoirotun nisa’ 2012-41-00 6 eka susanti widiastutik 2012-41-00 program studi agroteknologi fakultas pertanian universitas muria kudus 2013 2014 page 2 of 10 i sterilisasi alat sterilisasi alat dan media dilakukan pada alat-alat seperti botol kultur erlenmeyer gelas beaker petridish pinset pisau scapel gagang scapel alumunium foil gelas ukur botol kosong gunting dll sebaiknya sebelum disterilisasi peralatan dicuci dengan detergen kemudian dibilas dengan air yang mengalir dan dikeringkan kemudian dibungkus dengan kertas atau alumunium foil temperatur yang digunakan untuk sterilasasi alat-alat dengan autoclave yaitu 121°c pada tekanan 15 lds selama 60 menit berikut ini adalah langkah-langkahnya cara sterilisasi alat dengan autoclave 1 sebelum melakukan sterilisasi cek dahulu banyaknya air dalam autoclave jika kurang dari batas yang ditentukan maka dapat ditambah air sampai batas tersebut 2 masukan peralatan yang akan disterilisasi 3 tutup autoclave dengan rapat lalu kencangkan baut pengaman agar tidak ada uap yang keluar dari sisi autoclave klop pengaman jangan dikencangkan terlebih dahulu 4 nyalakan autoclave diatur dengan waktu 60 menit pada suhu 1210 c 5 kemudian klop pengaman ditutup dikencangkan 6 jika alarm tanda selesai berbunyi maka tunggu tekanan dalam kompartemen turun hingga sama dengan tekanan udara dilingkungan jarum pada preisure gauge menunjuk ke angka nol 7 kemudian klop-klop pengaman dibuka dan keluarkan peralatan yang sudah disterilisasi dengan hati-hati ii membuat media media yang kita buat adalah media ms0 media tersebut digunakan untuk mengecambahkan biji melon bahan yang diperlukan untuk pembuatan medium ga diantaranya 1 agar 4 gr 500ml 2 glukosa 15 gr 500ml 3 aquades 500 ml page 3 of 10 alat yang digunakan untuk membuat medium diantaranya 1 gelas piala gelas beker 2 magnetic stirrer magnet pengaduk 3 hot plate lempengan pemanas 4 spayer botol yang berisi aquades 5 botol kultur yang sudah disterilisasi 6 alumunium foil 7 karet 8 pinset 9 pipet 10 kertas ph 11 auto clave cara penggunaan hot plate magnetic stirrer 1 cara yang aman a sebelum dihidupkan periksa dulu power supply b pastikan komponen tersebut tidak terkena cairan c suhu udara antara 5-6 0c d jaga agar tidak terlalu basah dan terhindar dari debu e perangkat ini jangan digunakan pada tempat yang panas f ketika ada suara aneh getaran terlalu panas pada alat tersebut tolong matikan power supply dan putuskan sambungan g gunakan alat ini sesuai cara penggunaan dan fungsinya 2 nama bagian hot plate lempengan pemanas a power indikator lamp b stir knop speed controller pengatur kecepatan c heat knop temperatur controller pengatur suhu 3 cara penggunaan hot plate a caranya taruh stirrer bar ke dalam vescol dan tempatkan vescol di tengah di atas plat b sambungkan kabel pada power jika power hidup maka lampu akan menyala page 4 of 10 c puter heat knop searah jarum jam untuk mengatur suhu dengan analog putar juga srtir knop searah jarum jam untuk mengatur kecepatan analog d ketika ingin menggunakan dengan kecepatan lambat pertama-tama tempatkan unit di posisi 5 2 6 di atas tinggal putar saja cara membuat medium ga gula agar 1 gelas beker diisi dengan aquades sebanyak 400 ml 2 gelas beker diletakkan di atas hot plate 3 kemudian magnetic stirrer dimasukkan dalam gelas beker secara pelan-pelan 4 kemudian heat knop di atur sampai tekanan 300 0c dan stir knop diatur pada tekanan 2 5 setelah magnet sudah aktif gula dimasukkan dalam gelas beker yang berisi aquades ditunggu sampai gula seluruhnya larut 6 setelah gula larut agar-agar diasukkan dalam gelas beker tersebut sampai warna larutan tersebut jernih 7 setelah gula dan agar-agar masuk gelas ukur terssebut ditambahi aquades sampai mencapai 500 ml menggunakan spayer 8 kemudian ditunggu sampai larutan medium jadi sterilisasi media a botol kultur yang sudah berisi medium dimasukkan ke dalam autoclave untuk disterilisasi dengan tekanan botol 15-17 5 psi pada suhu 121ºc selama 60 menit b setelah disterilkan botol-botol yang berisi medium diangkat dan disimpan dalam ruangan sejuk sampai siap digunakan. c medium siap digunakan namun untuk mengetaui ada tidaknya kontaminasi dalam medium sebalikya iii sterilisasi eksplan 1 melon a bahan eksplan biji melon page 5 of 10 akuades steril larutanklorox i 50 50ml klorox 50ml akuades steril ii 25 25ml klorox 75ml akuades steril larutan deterjen 2 2gr deterjen dilarutkan dalam 98ml akuades steril plastik penutup botol b alat botol steril 3 buah gelas ukur steril laf c prosedur a sebelum dimasukkan ke laf biji melon yang sudah tidak berlendir dicuci dengan air mengalir dikeringkan 1 hari dalam suhu ruangan kemudian dimasukkan kedalam botol berisi larutan deterjen selama 15 menit sambil di kocok setelah selesai larutan deterjen dibuang biji melon dibilas dengan air bersih sampai kira-kira cukup bersih untuk dimasukan ke laf pindahkan biji melon di botol tadi kedalam botol steril yang akan dimasukan ke laf b biji melon di rendam dalam botol steril berisi klorox 50 selama 30 menit setelah selesai larutan klorox dituang kedalam botol kosong steril c rendam biji dengan aquades steril selama 15 menit setelah selesai tuang aquades kedalam botol kosong d rendam biji dengan klorox 25 selama 15 menit lalu air di tuangkan seperti pada proses sebelumnya e rendam biji dengan aquadeselama 60 menit sambil tetap di kocok lalu aquades dibuang kedalam botol lain f setelah semua tahap selesai tutup botol dengan plastic steril agar tidak terkontaminasi dan eksplan siap ditanam page 6 of 10 2 artemisia a bahan eksplan dari tanaman artemisia alcohol 75 klorox 5 25 aquades steril b alat-alat botol kosong steril 3 buah plastik penutup botol laf c prosedur a bersihkan potongan tanaman artemisia yang diambil dari lahan dengan air mengalir masukkan botol steril lalu bawa ke laf b rendam dengan alcohol 75 selama 1 menit lalu alcohol dituang dalam botol kosong steril c lalu rendam dengan klorox 5 25 selama 5 menit sambil terus di kocok agar bias bersih sampai kesela-sela bagian eksplan setelah selesai tuang klorox kebotol steril kosong d rendam dalam alcohol 75 selama 30 detik lalu tuangkan kebotol sisa rendaman e setelah selesai cuci ekplan dengan air akuades steril sebanyak 3 kali pembilasan sampai benar-benar bersih dari racun yang berasal dari zat kimia pencuci tadi f setelah selesai tutup dengan plastic steril dan eksplan siap di tanam page 7 of 10 penanaman eksplan pada media kultur jaringan 1 melon a alat-alat laf botol steril berisi eksplan pinset alumunium voil botol kultur berisi media alcohol 70 sebagai pensteril pinset lampu bunsen plastic steril b bahan eksplan biji melon media tanam c prosedur 1 ambil botol kultur berisi media buka tutup alumunium voil secara benar lalu alumunium voil dan botol kultur di dekatkan dengan api dengan maksud agar tidak kena patogen lalu taruh terbalik 2 sementara itu kita ambil pinset lalu kenakan api sebentar setelah kira-kira tidak panas kita pakai untuk mengambil eksplan biji melon lalu dimasukkan kedalam botol kultur pinset dikembalikan ke botol berisi alcohol agar steril 3 lalu bibir botol kultur dan alumuium voil di dekatkan api lagi lalu tutup dengan rapat dan benar page 8 of 10 2 artemisia a alat-alat laf botol steril berisi eksplan pinset alumunium voil botolkultur berisi media alcohol 70 sebagai pensteril pinset dan pisau lampu bunsen plastic steril pisau scapel gagang scapel cawan petri berisi kertas saring b bahan a eksplan eksplan daun dan batang artemisia b media tanam c prosedur 1 ambil gagang scapel dan juga pusau scapel lalu dipasangkan setelah selesai lalu kenakan api lalu taruh pada botol berisi alcohol agar selalu steril 2 buka cawan petri sebagai tempat pengiris eksplan 3 ambil eksplan berupa daun atau batang letakan di cawan petri iris kecil saja lalu bagiang pangkal iris sedikit dengan 1 kali sayat lalu letakkan pisau dan pinset di alcohol lagi page 9 of 10 4 buka botol kultur di dekat api lalu tanam eksplan dengan pinset dengan sayatan menempel di media 5 letakkan lagi pinset di botol alcohol dan tutup botol kultur dengan benar iv membunuh kontaminan alat autoclave manual bahan alat-alat kultur yang terkena kontaminan botol kultur cawan petri alumunium foil plastik kertas penyaring dan karet cara kerja - mengecek air dalam autoclave air harus pas dan tidak boleh melebihi sarangan dalam autoclave - menghubungkan kabel autoclave pada stop kontak lalu menyalakan tombol on pada autoclave - memasukkan semua alat-alat kultur yang telah terkena kontaminan kedalam autoclave dan menutup rapat - menaikkan suhu autoclave hingga mencapai 250c - menunggu sampai timer autoclave mencapai angka 20 jangan sampai melebihi karena autoclave bisa meledak page 10 of 10 - setelah timer autoclave mencapai angka 20 autoclave dimatikan kemudian suhu diturunkan menjadi 2000c dan secara otomatis timer autoclave akan turun menunggu timer autoclave mencapai menjadi 15 - menunggu beberapa saat sampai timer autoclave menjadi 20 lagi - setelah mencapai angka 20 autoclave dimatikan dan menurunkan suhunya sampai 0 - membuka lubang uap autoclave dengan perlahan-lahan - menunggu hingga uap autoclave tidak tersisa kemudian tutup autoclave dibuka - alat-alat yang telah terkontaminan dikeluarkan dari autoclave dan merendam dalam air bersih sampai dingin - membersihkan alat-alat tersebut dengan air mengalir dan meletakkannya pada wadah yang bersih 8 of 10 displaying laporan praktikum bu ida yg jadi.docx